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大鼠转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒实验使用说明书
BS-2889大鼠转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒
一、试剂盒组成与保存条件
大鼠转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒通常包含以下主要组分：
预包被微孔板(8×12 strips或8×6)
TGF-β2标准品(冻干粉，通常浓度为10,000pg/mL)
生物素标记的检测抗体(120μL/70μL)
HRP标记链霉亲和素(120μL/70μL)
TMB显色液(10mL/6mL)
终止液(2M H?SO?，10mL/6mL)
洗涤缓冲液(20×浓缩液)
样本稀释液
标准品稀释液
保存条件：未拆封试剂盒应4℃保存;拆封后，标准品需-20℃保存，其他组分4℃保存?
二、实验前准备
1. 样本处理
血清?：室温血液自然凝固10-20分钟，2000-3000转/分离心20分钟，仔细收集上清，如出现沉淀应再次离心?
血浆?：选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后离心(2000-3000转/分，20分钟)，收集上清?
细胞培养上清?：离心去除颗粒后分装保存于-80℃，避免反复冻融?
组织匀浆?：按重量体积比1:9加入PBS匀浆，离心后取上清?
2. 试剂平衡
所有试剂及样本需室温(18-25℃)平衡30分钟，避免37℃直接溶解?
3. 标准品配制
复溶标准品后，用稀释液梯度稀释至5,000pg/mL→78pg/mL(7个浓度点)，0pg/mL为空白对照?
三、实验步骤(双抗体夹心法)
加样?：每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育90分钟?
洗涤?：弃液后用PBST洗涤液洗板5次，每次拍干?
加检测抗体?：每孔加100μL生物素化抗体(1:100稀释)，37℃孵育60分钟?
加酶结合物?：加入HRP标记链霉亲和素(1:100稀释)，37℃避光孵育30分钟?
显色?：加TMB显色液100μL/孔，避光反应15-20分钟(显蓝色)?
终止与读数?：加50μL终止液(变黄色)，10分钟内在450nm波长测OD值(参考波长570-630nm)?
四、数据分析
标准曲线绘制?：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，拟合四参数逻辑曲线(R2>0.99)?
样本浓度计算?：根据样本OD值从曲线反推浓度，超出范围需稀释后重测?
质量控制?：批内CV应<10%，批间CV<12%?
五、注意事项
安全防护?：
避免直接接触终止液和底物A、B，一旦接触尽快用水冲洗?
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品?
禁止用嘴吸取试剂盒任何成分?
操作要点?：
试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温?
实验中不用的板条应立即放回包装袋密封保存?
避免细菌污染、反复冻融或剧烈震荡?
一次加样时间控制在10分钟内，样本多时推荐使用多道移液器?
干扰因素?：
不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制HRP活性?
避免溶血或脂血样本影响检测结果?
结果判读?：
反应孔内颜色越深，阳性程度越强?
阴性反应为无色或极浅，可用"+"、"-"号表示?
也可测OD值：若大于阴性对照OD值的2.1倍即为阳性?
六、技术参数
灵敏度?：通常
注：以上资料仅供参考，具体请咨询技术老师或品牌供应商。
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